Automate de déshydratation et imprégnation en paraffine
Un automate de déshydratation et imprégnation en paraffine, Logos One, Thermo Fischer, MM France, acquis en 2017, utilisé uniquement par le personnel de la plate-forme permet la déshydratation automatique et l'imprégnation en paraffine de 210 échantillons à la fois, quel que soit le type tissulaire ou l'espèce. Le protocole est un cycle long avec une étape de déshydratation en éthanol croissant puis isopropanol suivie de l’étape d’imprégnation en paraffine. L’inclusion en bloc est réalisée le lendemain matin manuellement sur une table d’inclusion Tissue -Tek.
Cryostat et Microtomes
- 1 cryostat, NX 70, Thermo Fischer, MM France, acquis en 2018, pour la réalisation de coupes des tissus congelés. Epaisseur de coupes recommandée : 7µm
- 1 cryostat, Leica, en L2 pour la coupe de tissus humains.
- 1 microtome, RM 2155, Leica, permettant la réalisation de coupes, 4µm d'épaisseur recommandée, à partir de tissus fixés inclus en paraffine.
- 1 microtome, RM 2145, Leica, pour les utilisateurs
- 1 microtome complètement automatisé, Autosection, Tissue Tek, Sakura, acquis en 2018, à l’usage exclusif du personnel de la plateforme, pour la réalisation des coupes de routine mais aussi d’échantillons plus difficiles. Ce microtome effectue automatiquement et systématiquement le parallélisme entre le bloc de tissu paraffine et la lame de rasoir pour limiter le dégrossissage des blocs et donc la perte de matériel.
Automate de coloration des lames
Un automate de colorations histologiques, SPECTRA, Leica, acquis en 2019. Cette automatisation des colorations sur coupes de tissus congelés ou inclus en paraffine offre la possibilité d'intégrer indépendamment 30 lames toutes les 5 minutes et de réaliser des colorations standards (HES, HE, trichrome de Masson) ou spécifiques ou spécifiques- Rouge Sirius (collagène et fibrose), Pearls (fer), Oil-red-O (lipides et stéatose), PAS (Acide Périodique Schiff) et Bleu Alcian (mucopolysaccharides)…
Des protocoles de déparaffinage seul et de déshydratation des lames seule sont également disponibles pour traiter les lames au début ou à la fin d’un processus manuel.
Automate d’immunomarquage
Une chambre de démasquage (Abcys) indispensable pour le démasquage antigénique en prétraitement des immunomarquages manuels en fluorescence ou visible, en particulier pour les tissus fixés à la paraformaldéhyde, congelés ou inclus en paraffine. Elle permet un démasquage contrôlé, régulé et efficace des sites antigéniques des coupes de tissus afin de les rendre accessibles aux anticorps primaires.
Un automate d'immunomarquage Bond RX (Leica) pour la prise en charge de tout type d'immunomarquage pour un gain de temps et un gain de qualité, fiabilité et reproductibilité des résultats. Sa capacité est de 30 lames, toutes indépendantes. Il est à usage exclusif du personnel de plateforme pour la réalisation des prestations.
Différents types de marquages sont possibles :
- Monomarquage fluorescent
- Monomarquage avec révélation visible chromogénique (DAB/ Marron ou Rouge)
- Double ou triple marquage en fluorescence
- Double marquage en visible (DAB/Marron et 1 autre chromogène)
- Multiplexing technique OPAL et Ultivue (En développement)
Station de Production de blocs de TMA
Le Système de TMA, Minicore, Excilone, acquis en 2018, est un système semi-automatisé qui permet la création de blocs de Tissue Micro Array. A partir de dizaines de blocs de paraffine donneurs, on obtient un bloc de paraffine receveur composé d’un échantillonnage de dizaines de tissus différents. Il s’agit donc de diminuer le nombre de blocs à traiter pour un gain de temps, de coûts, de réactifs. Les différents tissus sont alors tous traités sur une unique lame, en même temps, dans des conditions expérimentales identiques pour une meilleure fiabilité des résultats et une analyse facilitée des résultats.
Scanner de lames
Un scanner de lames, le "Lamina slide scanner" haut débit (250 lames automatisables) de chez Akoya Perkin Elmer. Cet automate est capable de faire l'acquisition de vos lames entières en quelques minutes, que ce soit en lumière visible (colorations histologiques ou révélation DAB des immunomarquages) ou en fluorescence, et d'en créer des lames virtuelles de haute résolution. Les lames virtuelles sont ensuite très facilement observables avec des logiciels spécifiques, comme Case Viewer ou Pannoramic Viewer, téléchargeables gratuitement sur internet. Avec ces logiciels appelés « microscopes virtuels », vous pouvez zoomer sur les régions d’intérêt sans perdre en résolution, en faire des captures, des annotations, des mesures, des comptages manuels.
Ci-dessous, les longueurs d’ondes d’excitation et d’émission des filtres disponibles :
|
Filtres |
Excitation |
Emission |
Canal |
|
DAPI |
387 ± 18 |
440 ± 44 |
1 |
|
FITC |
485 ± 26 |
521 ± 27 |
2 |
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TRITC/TsRed |
559 ± 32 |
607 ± 40 |
3 |
|
Cy5 |
649 ± 19 |
700 ± 57 |
4 |
|
TRITC-BZ-HE |
543 ± 20 |
593 ± 40 |
5 |
Microdissecteur laser
Un microdissecteur laser Arcturus XT, Excilone. La technique de microdissection laser permet de s'affranchir de l'hétérogénéité d'un tissu en dissociant, sur coupe de tissu, avec des lasers IR ou UV, différents types cellulaires ou territoires d’intérêt, pour les analyser au niveau moléculaire, de façon spécifique, indépendamment de l’environnement tissulaire et donc de révéler aussi des expressions moléculaires faibles. Cette technique est recommandée principalement sur coupe congelée, préalablement colorée au crésyl violet ou immunomarquée (visible ou fluorescence). Le recueil de la population cellulaire ou de la région d'intérêt s'effectue à l'aide d'une capsule qui va ensuite s'adapter à un tube PCR contenant le tampon de lyse pour l’extraction des protéines, de l'ADN ou des ARN.
Filtres fluorescents disponibles sur notre système :
|
Filtres |
Excitation |
Emission |
|
DAPI |
387 ± 18 |
440 ± 44 |
|
FITC |
450-490 |
520 |
|
TRITC |
540/25 |
605/55 |
